製品の仕様

 操作概要

1.転写後の膜上のトータルタンパク質の確認
		ブロッティングが終わった膜をブロッティング装置から取り出します。
(1)前処理		「Wash」液をメタノールと1:1に混合して前処理溶液を調製し、トレイに入れます。ブロッティングが終わった膜を上記のトレイにいれ、振とうします。
(2)染色		「Wash」液を廃液し、「Stain」液をトレイに入れ、振とうします。
(3)脱色		「Stain」液を廃液し、「de-Stain」液をトレイに入れ、振とうします。
(4)検出		膜を、トレイから取り出します。バンドを目視し、転写結果を確認します。画像として保存する場合は、スキャナーまたは撮影装置を使用します。

2.抗体反応のためのタンパク質バンドの脱色
(1)前処理		「Wash」液をメタノールと1:1に混合して前処理溶液を調整し、トレイに入れます。染色し、転写結果を確認し終わった膜を上記のトレイにいれ、振とうします。
(2)完全脱色		「Wash」液を廃液し、「Bleach」液をトレイに入れ、振とうします。
(3)リンス		「Bleach」液を廃液し、純水でリンスします。
(4)抗体反応		ブロッキング操作から開始し、通常通り、抗体反応　～　検出を行います。

 データ例

1.転写後の膜染色

転写後の膜を、1/2にカットし、一方は、従来の染色法(ポンソーS)で染色しました(A)。もう一方は、EzStainAQua MEMで染脱色しました(B)。

サンプルは、Hela細胞抽出液の3/4希釈系列を作製し、アプライしました。EzStainAQua MEMは、すべての濃度で検出できました。

(A)ポンソーS	(B)EzStainAQua MEM

2.染色後の抗体反応

転写後の膜を、1/2にカットし、一方は、通常の操作で、抗体反応を行い、発光検出を行いました(A)。

もう一方は、EzStainAQua MEMで染脱色後に、同様に抗体反応をおこない、発光検出を行いました(B)。

どちらも同等の検出ができていることから、染色による抗体反応へ影響しないことが示されました。

(A)未染色	(B)染脱色

3.トータルタンパク質によるノーマライズ

(A)EzStainAQua MEM	(B)EzWestBlue W

　泳動後に転写した膜をEzStainAQua MEMで染色し、Printgraph Classicを用いて画像データを取得しました(A)。サンプルは、HepG2細胞抽出液の3/4希釈系列を作製し、アプライしました。取得した画像は、CS Analyzer 4を用いて、トータルタンパク質のシグナル値(輝度値)を算出しました。その後、Bleach液を用いてタンパク質バンドの脱色を行い、ターゲットタンパク質(GAPDH)の検出をEzWestBlue Wを用いて行い、CS Analyzer 4を用いて、シグナル値(輝度値)を算出しました(B)。それぞれ得られた輝度値の結果、およびトータルタンパク質でターゲットタンパク質をノーマライズした結果を右のグラフに示しました。トータルタンパク質(A)およびターゲットタンパク質(B)はどちらも濃度依存的に推移しています。また、トータルタンパク質によるノーマライズ値も、すべての希釈濃度においてほぼ同じ値を示しています。このように、EzStainAQua MEMおよびEzWestBlue Wを用いてトータルタンパク質によるノーマライズができることが確認されました。

染脱色試薬「EzStain AQua MEM」カタログ

「ウエスタンブロット 試薬・消耗品」カタログ

「EzStain AQua MEM」取扱説明書

「EzStain AQua MEM」SDS

サンプル提供

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