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ちょこっと豆知識　『SDS-PAGE用サンプル調製』

サンプル溶液と還元剤やSDSが含まれたサンプル処理液を混合します。その混合液を95℃で3～10分間加熱し、還元およびSDS処理を行います。これでSDS-PAGE用のサンプルは完成です。

還元剤としてβ⁻メルカプトエタノールも使用されていますが、DTT はその数十倍ほど還元力が強いと言われています。DTTを使用すると還元が十分に行われるため、バンドがブロードにならず、よりシャープに分離することができます。電気泳動の結果は、試料の調製方法によっても左右されますので、還元剤の選択は良い結果を得るためにも重要です。
EzApplyは、DTTを用いた試料調製用バッファーです。ぜひご活用ください。

ATTO 泳動サンプル調整試薬　セレクションガイド

型番	AE-1430	AE-1435	WSE-7010	WSE-7011	WSE-7040
品名	EzApply	EzApply 2D kit	EzLabel FluoroNeo	EzApply Native	EzApply DNA
用途	SDS-PAGEサンプル調整用（2ｘ conc.）	二次元電気泳動サンプル調整用	SDS-PAGEサンプル調整用	Native-PAGEサンプル調整用（10ｘ conc.）	DNA泳動サンプル用ローディングダイ（6ｘ conc.）
主成分	トリス-HClバッファー, SDS, ショ糖, DTT, BPB	①　Wash Buffer：トリス、塩化ナトリウム ②　Solution 1：トリス、両性担体、DTT ③　Solution 2：尿素、チオ尿素、界面活性剤、両性担体、DTT ④⑤　Solution 1-2、2-2：アルキル化試薬、BPB ⑥⑦　重層液：尿素	①Sample Buffer(5x): 界面活性剤、緩衝剤 ②Labeling reagent: 蛍光試薬 ③　Reducing agent (DTT): DTT、ブロモフェノールブルー ④　分子量マーカー: タンパク質、グリセロール ⑤RIPA Lysis buffer:　界面活性剤、緩衝剤	トリス、グリセリン、ブロモフェノールブルー、クマシーブリリアントブルー	15% Ficoll, 0.05% ブロモフェノールブルー, 0.05％赤色色素
容量	5mL×5	①　Wash Buffer：30mLｘ2 ②　Solution 1：20mL ③　Solution 2：10mL ④　Solution 1-2：粉末 ⑤　Solution 2-2：粉末 ⑥　Solution 1重層液：1mL ⑦　Solution 2重層液：1mL ⑧　Solution 1用DTT：粉末 ⑨　Solution 2用DTT：粉末	①　Sample Buffer(5x):12mL ②　Labeling reagent: 10 mg ③　Reducing agent (DTT): 300 mg ④　MW marker: 600 μL（220,116,97,66,45,30,20.1,14.4kDa） ⑤　RIPA Lysis buffer: 10 mL	40mL	10mL
調製方法	2×ストック溶液：DTTボトルに EzApplyを5mL加えて調製	DTTをSolution1またはSolution2に加えて調製	Labeling reagentをMeOHまたはアセトニトリルに溶解 DTTをDWに溶解	不要	不要
使用方法	電気泳動サンプルの調製：調製したEzApplyとタンパク質溶液を1:1で混合し、５分間煮沸する	サンプルにより調整方法が異なるため取扱説明書を参照してください	サンプルにSample bufferとLabeling reagent添加して95℃3分間処理、DTT溶液を添加してさらに95℃3分間処理する	タンパク質抽出液に1/10容量添加する	DNA溶液5µLに本製品を1µL添加する
使用量	1250サンプル分（20μLのサンプルに20μL使用した場合）	哺乳類組織・菌体等 100mgからの抽出で20回分	2000サンプル分（20μLのサンプルに5μL使用した場合）	適量	適量
保存期間	-20℃ 6ヶ月	-20℃ 6ヶ月	-20℃　１年	冷蔵保存　1年	冷蔵保存  1年

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