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アガロースゲル電気泳動 基本操作

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アガロースゲルを使用した電気泳動は、核酸を分析する手段として一般に広く使われている方法です。ゲルを緩衝液に沈めて電気泳動をすることから、海中の潜水艦(サブマリン) に例えて、この方法はサブマリン電気泳動といわれています。
DNAを構成しているヌクレオチドはリン酸残基によりマイナスに荷電しています。アガロースゲルにDNA(試料)を添加し、緩衝液中で電気を流すと、DNAはプラス側(陽極)に移動します。この時、アガロースゲルの網目構造により大きなサイズのDNAはゆっくりと動くのに対して、小さいDNA はより速く動きます。この原理を利用してDNAを分離する方法がアガロースゲル電気泳動です。
タンパク質の電気泳動でよく使用されるポリアクリルアミドゲルも同じような網目構造を持ちますが、アガロースゲルの方がその網目が大きく、DNAの大きさによって使い分けをします。アガロースゲルは、約0.5~20kbpのDNAを分離するのに適しているといわれています。
今回は、アトーの製品を使用したサブマリン方式のアガロースゲル電気泳動の基本操作に関してご紹介します。

実験の流れ

1.サンプル調製


サンプル調製.png

細胞や組織、血液など様々な試料からDNAを抽出します。抽出したDNAをEzApplyDNAと混合し、泳動サンプルを調製します。

使用する製品
ローディングバッファー
(EzApplyDNA)

2.ゲルの作製


ゲルの作製.png

目的DNAの分離に適したアガロース濃度のゲルを作製します。EzRunTAEEzRunTBEバッファーに秤量したアガロースを入れ、電子レンジまたは湯せんでアガロースを溶解します。

使用する製品
電極バッファー
(EzRunTAE, EzRunTBE)

3.電気泳動


電気泳動.png

サブマージ ミニ(電気泳動装置)で電気泳動を行い、DNAを分離します。

使用する製品
電極バッファー
(EzRunTAE, EzRunTBE)
電気泳動槽
(サブマージ ミニ)

4.ゲルの染色と撮影


ゲルの染色と撮影.png
泳動後のゲルをEzFluoroStain DNAEzPreStain DNA&RNAまたはエチジウムブロマイド(EtBr)で染色します。染色後のゲルを蛍光撮影し、分離したバンドを確認、解析します。

使用する製品
ゲル染色液
(EzFluoroStainDNA, EzPreStain DNA&RNA)

資料ダウンロード

動画で紹介

サブマージ ミニの使用方法